Development of TaqMan Real-Time Polymerase Chain Reaction Assay for Detection of Chicken Anemia Virus in Newcastle Disease Vaccines

Document Type : Original Articles

Authors

Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education and Extension Organization (AREEO), Karaj, Iran

Abstract

Exogenous chicken anemia virus (CAV) has been detected in commercial poultry vaccines in various countries of the world. The presence of unwanted CAV in vaccines not only influences the epidemiology of chicken infectious anemia disease, but may also lead to vaccine failure and confusing results when vaccine responses are monitored. To detect CAV in contaminated vaccines, nucleic acid testing (unlike conventional testing) has a shorter processing time and does not require cell culture or live animals. The aim of the current study was to develop a TaqMan real-time polymerase chain reaction (PCR) assay to detect and quantify CAV in poultry vaccines and investigate CAV contamination in Razi live Newcastle disease vaccines. The TaqMan real-time PCR assay was set up, optimized, and validated in successive experiments. A standard plasmid pUC-VP2 containing viral protein 2 of CAV was constructed and used in the assay to generate a standard curve to quantify CAV genomes. A clear linear correlation was observed between threshold cycle (Ct) values and plasmid copy numbers in the amplification plots of 10-fold serial dilution of the plasmid. Total DNA of three samples of each of four different Razi live Newcastle disease vaccines, namely LaSota, B1, clone.12IR, and thermo-resistant strains, were extracted and subjected to real-time PCR assay. No CAV contamination was detected in the Razi Live Newcastle vaccines. The developed TaqMan real-time PCR assay provides a quick, specific, and sensitive method for use in detecting CAV in quality control vaccine testing and viral load studies.

Keywords

Main Subjects

Article Title [French]

Développement du Test de Réaction de Polymérisation en Chaîne en Temps Réel TaqMan Pour la Détection du Virus de l'anémie du Poulet Dans les Vaccins Contre la Maladie de Newcastle

Abstract [French]

Le virus de l'anémie exogène du poulet (VAP) a été détecté dans des vaccins de volaille commerciale dans divers pays du monde. La présence de VAP indésirable dans les vaccins influence non seulement l'épidémiologie de l'anémie infectieuse du poulet, mais peut également entraîner un échec du vaccin et des résultats confus lorsque les réponses vaccinales sont surveillées. Pour détecter la VAP dans les vaccins contaminés, les tests d'acides nucléiques (contrairement aux tests conventionnels) ont un temps de traitement plus court et ne nécessitent pas de culture cellulaire ou d'animaux vivants. L'objectif de la présente étude était de développer un test de réaction de polymérisation en chaîne (RPC) en temps réel TaqMan pour détecter et quantifier la VAP dans les vaccins de volaille et étudier la contamination par la VAP dans les vaccins vivants de Razi contre la maladie de Newcastle. Le test RPC en temps réel TaqMan a été mis en place, optimisé et validé au cours d'expériences successives. Un plasmide standard pUC-VP2 contenant la protéine virale 2 de VAP, a été construit et utilisé dans le test pour générer une courbe standard pour quantifier les génomes de VAP. Une corrélation linéaire claire a été observée entre les valeurs de cycle seuil (Ct) et les nombres de copies de plasmide dans les parcelles d'amplification de la dilution en série 10 fois du plasmide. L'ADN total de trois échantillons de chacun des quatre vaccins vivants de Razi contre la maladie de Newcastle, à savoir LaSota, B1, clone.12IR et des souches thermorésistantes, ont été extrait et soumis à un test RPC en temps réel. Aucune contamination par la VAP n'a été détectée dans les vaccins vivants de Razi contre la maladie de Newcastle. Le test RPC en temps réel TaqMan développé fournit une méthode rapide, spécifique et sensible à utiliser pour détecter la VAP dans les tests de contrôle de qualité des vaccins et les études de charge virale.

Keywords [French]

  • VAP
  • RPC en temps réel
  • Maladie de newcastle
  • contamination vaccinale
  • virus exogène

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Archives of Razi Institute
Volume 76, Issue 3
September 2021
Pages 421-427

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