Document Type : Original Articles
Authors
1 Department of pathobiology, Faculty of Veterinary Medicine, Lorestan University, Khorramabad, Iran
2 Department of Animal Science, Faculty of Agriculture, Ferdowsi University of Mashhad, Mashhad, Iran
3 Department of Animal Science, Faculty of Agriculture, Lorestan University, Khorramabad, Iran
Abstract
Keywords
Main Subjects
Article Title [French]
Clonage et expression des gènes Com1 et OmpH de Coxiella burnetii dans l’espace périplasmique d'Escherichia coli afin de produire des vaccins à base de sous-unités recombinants
Abstract [French]Coxiella burnetii est une bactérie obligatoire et à Gram négatif qui provoque la fièvre Q (ou coxiellose). Malgré l’importance de la fièvre Q, il n’existe pas de vaccin universel contre cette maladie. Il serait donc utile de développer des vaccins à base de sous-unités recombinants utilisant Com1 et OmpH comme protéines immunogènes. Dans ce but, les gènes de Com1 et OmpH ont été amplifiés par PCR, puis les produits de PCR ont été purifiés par la technique de précipitation d’ADN. Pour le clonage, tout d'abord, les deux gènes ainsi que le vecteur pET-22b (+) ont été digérés par les enzymes NcoI et Xhol, puis Com1 et OmpH ont été ligaturés dans des vecteurs linéaires par l'ADN ligase T4. Les vecteurs recombinants ont été transformés dans la souche BL21 (DE3) d'Escherichia coli et l'expression a été incitée par l'isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside. L'expression de Com1 et OmpH a été vérifiée par électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de dodécylsulfate de sodium. Enfin, la purification des deux protéines a été effectuées par des colonnes Ni-NTA et a été ensuite confirmées par Western blot. L'évaluation des résultats sur gel d'agarose à 1% a révélé qu'une amplification PCR, la précipitation de l'ADN et la digestion des deux gènes ont été effectuées avec succès. Les résultats des PCR des colonies et le séquençage a révélé que Com1 et OmpH étaient correctement clonés dans pET-22b (+). Enfin, les résultats d’expression, de purification et de Western blot des deux protéines ont montré que la souche BL21 (DE3) d’Escherichia coli exprimait correctement les protéines Com1 et OmpH. Au vu des résultats, il semble qu'Escherichia coli représente une hôte abordable et simple d’application pour exprimer les gènes Com1 et OmpH. Il convient de mentionner que les produits issus de ce projet peuvent potentiellement rentrer dans la composition de vaccins à base de sous-unités recombinants contre la fièvre Q.
Keywords [French]
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