Development of a Lateral Flow Immunoassay Using Recombinant Dense Granular Antigen (GRA) 7 to Detect Anti-Toxoplasma gondii IgG Antibodies

Document Type : Original Articles

Authors

• H. Morovati ^{1, 2}
• S. J. Seyyed Tabaei ¹
• M. Gholamzad ³
• K. Omidfar ⁴
• A. Ahmadi ⁴
• Z. Arab Mazar ⁵
• A. Eshaghi ²
• F. Sheikhsofla ⁶

¹ Department of Parasitology and Mycology, Faculty Medicin, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran

² Department of Quality Control, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research Education and Extension Organization, Karaj, Iran

³ Department of Microbiology and Immunology, Islamic Azad University, Tehran Medical Branch, Tehran, Iran

⁴ Biosensor Research Center, Endocrinology and Metabolism Molecular-Cellular Sciences Institute, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran

⁵ Infectious Diseases and Tropical Medicine Research Center, Shahid Beheshti University of Medial Sciences, Tehran, Iran

⁶ Department of Technical and Research Lab, Arvin Pazhoohan Noor (APN), Tehran, Iran

Abstract

Keywords

• Toxoplasma gondii
• rGRA7
• Rosetta (DE3)
• pET-32a(+)
• lateral flow immunoassay (LFA)

20.1001.1.03653439.2019.74.1.5.3

Main Subjects

• Parasitology

Article Title [French]

Développement d'un Dosage Immunologique à Flux Latéral Utilisant l'Antigène GRA7 Recombinant pour Détecter les Anticorps IgG Anti-Toxoplasma gondii

Toxoplasma gondii est un parasite protozoaire intracellulaire responsable de la toxoplasmose avecune importance médicale pour les femmes enceintes et les patients immunodéprimés. Ces dernières années, de nombreuses méthodes ont été développées pour la détection des infections causées par ce parasite. Cependant, la plupart des méthodes développées ne sont pas suffisamment sensibles. La protéine antigène granulaire 7 (GRA7) est une protéine hautement immunogène utilisée comme antigène spécifique pour le diagnostic de la toxoplasmose. Cette étude a été conçue pour produire un antigène GRA7 (rGRA7) recombinant dans un système bactérien afin de l’appliquer en tant qu’antigène dans ledéveloppement d’une bandelette de test simple et rapide d’immunoessai à écoulement latéral à l’aide d’anticorps conjugués à des nanoparticules d’or (nanoparticle-pAb) afin de détecter les anticorps IgG spécifiques du Toxoplasma dans des sérums humains. Après l'extraction de l'ADN génomique des tachyzoïtes de la souche RH, une réaction en chaîne de la polymérase (PCR) a été effectuée à l'aide d'amorces spécifiques, tout en tenant compte des sites de restriction et des enzymes BglII et XhoI. Ensuite, le gène GRA7 a été cloné dans le vecteur d'expression pET-32a (+), puis le pET-32a(+)-GRA7 a été transformé en Rosetta (DE3). La production de protéines recombinantes a été induite par l'isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside et purifiée par chromatographie d'affinité Ni-NTA. Afin de réaliser le test de bande, le conjugué anti-IgG humain etnanoparticules d'or a été a été ajouté à un tampon conjugué. L'antigène rGRA7 a été ensuite immobilisé sur une membrane de nitrocellulose en tant qu'agent de capture et des tampons d'échantillon et d'absorbance ont été assemblés sur une carte support. Pour l’analyse de la sensibilité et de la spécificité de l’analyse, les échantillons de sérum des patients sélectionnés ont été testés par la méthode standard d'immunoessai par chimiluminescence (CLIA), puis comparés aux résultats obtenus avec les bandelettes TOXO-IgG. Les résultats ont montré que l'utilisation de rGRA7 était une technique précise, sensible et peu coûteuse pour la détection rapide d'IgG anti-Toxoplasma dans des sérums humains.De ce fait, rGRA7 peut être utilisé comme agent de diagnostic dans les laboratoires.

Keywords [French]

• Toxoplasma gondii
• rGRA7
• Rosetta (DE3)
• pET-32a(+)
• Dosage immunologique à flux latéral (LFA)